本文标题："叶绿体DNA酶解实验-鉴定体细胞图像显微镜"
发布者：yiyi ------ 分类: 技术文章 ------
人浏览过-----时间：2017-7-11 5:39:38
叶绿体DNA酶解实验-鉴定体细胞图像显微镜
细胞器基因组
细胞器基因组包括叶绿体DNA(cpDNA)和线粒体DNA(mtDNA)。可
以用合适的细胞器DNA探针与待定的杂种细胞总DNA进行杂交，或者
检查富集纯化的细胞器DNA的限制性酶解图谱的方法，对体细胞杂
种与其融合亲本的细胞器DNA进行比较。比较的结果就可以用以判
定融合产物中的叶绿体或线粒体是否与融合亲本的一方或双方相同
，或者是新的一种。用克隆的cpDNA或mtDNA片段对酶解的总DNA进
行Southern杂交，是一种鉴定体细胞杂种细胞器基因组的较好的方
法，它仅需少量的植物材料。但是，要注意的是，不同的细胞器DN
A之间可能会具有一定的同源性，因此会产生非特异的信号。
cpDNA的分离主要有两步：
·分离完整的叶绿体。
·从叶绿体中提取cpDNA。
要得到高质量、高产量的cpDNA，最重要的是优化第一步。而在
第一步中，匀浆和梯度离心又是很重要的步骤。如果用Waring匀浆
器匀浆产生大量的泡沫和破碎的叶绿体，那么可以用剃须刀片把组
织切成薄条，释放出叶绿体。如果用梯度离心收集叶绿体结果不大
令人满意，可以尝试不同的蔗糖浓度或者用PercoU梯度。
如果叶绿体DNA酶解后，在凝胶上有很强的背景，那么可以尝
试甲基化敏感的限制性内切酶(例如：Smal工和Pstl)，因为它们优
先酶解非甲基化的cpDNA和mtD-NA。而核DNA由于带有大量的甲基化
限制性位点，用这些酶几乎不能酶解。
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