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本文标题:"流式细胞仪是以显微镜技术为基础的仪器"

发布者:yiyi ------ 分类: 行业动态 ------ 人浏览过-----时间:2012-12-14 0:41:54

流式细胞技术简介

 
流式细胞仪是以显微镜技术、血球计数仪、喷墨技术为三大基础发展出的仪器,主要由液流系统、光学系统、 电子系统所组成。原理为利用鞘液(Sheath Fluid)流通过程中,加压使样品分析管中的细胞悬浮液循采样管经管路进入液流腔(Flow Chamber),由于管径缩减,形成流体动力聚焦(Hydrodynamic Focusing),让细胞或悬浮粒成为单颗排列,依序通过打在分析槽(Flow Cell)上的雷射。由于细胞的大小及内容物会对雷射光造成散射,并且,雷射能够激发标定于细胞上的萤光物质,因此能藉由收集前散射光(FS)、侧散射光(SS)、萤光(FL)的光学讯号,转换为电子讯号,加以分析而得知样品中的细胞类型及特性
 
  流式分析图表以柱型图(Histogram)及点图(Dot Plot)为主。使用柱型图时需先指定 X 轴显示项目,例如萤光强度(FL intensity),Y 轴则显示相对应于不同讯号强度的颗粒数(events);使用点图则 X、Y 轴均需指定,例如 X 轴显示前散射光强度(FS integral)、Y 轴显示侧散射光强度(SS log)。不论是柱型图或点图,均可界定或圈选细胞群,针对特定细胞群做进一步分析。完成分析后,可圈选出欲分选的目标细胞群。
 
 
 
  除了分析之外,流式细胞分析分选仪的另一个主要功能即细胞分选(Sorting),能够进行细胞分选的液流腔必须结合有压电或电磁转换器(Piezoelectric Transducer or Electromagnetic Transducer),并须在分析时加上电极板。由于分选时仍需以雷射光侦测通过的细胞讯号,便可知道目前通过的细胞是否落于欲分选的目标群,同时,利用压电转换器带动液流腔,藉振波原理使流通的水柱形成水珠,当将振动频率、振幅调整至适当大小时,即可利用水珠携带如细胞之类的颗粒物质。若通过的细胞落于欲分选的目标群范围,压电转换器即瞬间通电而使水带电,因此水珠自水柱断裂时带有电荷,带电荷的水珠由下方两侧分别带正负电的电极板(Deflection Plates)引导,落入两侧的样品收集管中。利用让水珠带正电或负电,可决定其所携带的细胞要落入哪一侧的样品收集管,不带电的水珠(非目标细胞)则落入中央的收集管或废液区。收集的细胞可供后续培养或实验使用。
 
 
  流式细胞分析技术可应用于细胞週期分析、基因组大小评估、核型分析(Karyotyping)和染色体分选、精细胞分析分选、微生物分析分选、钙离子及膜电位分析、胞器分选、血液及骨髓细胞和淋巴细胞分析分选、癌症研究、临床检验等方面。

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